Интернет-журнал "Домашняя лаборатория", 2007 №9 - Журнал «Домашняя лаборатория»

Для получения посевного и основного субстратов вам могут понадобиться бумажные и опилочные прессованные гранулы. Гранулы из прессованной бумаги продаются в моей местности под названием Crown ТМ Animal Beddings и Good Mews Cat Litter (названия подстилки для животных и подсыпки для кошек). Подобные материалы можно найти в хозяйственных магазинах для животных. В сельской местности США и Канады прессованные гранулированные опилки можно встретить в хозяйственных магазинах, магазинах для фермеров, магазинах, торгующих печами, работающими на гранулированных опилках и т. д. В городских районах поищите телефоны компаний, занимающихся продажей печей, работающих на прессованных опилках или свяжитесь со своими знакомыми, живущими в сельской местности. Возможно, для приобретения гранулированных опилок вам придется предпринять поездку за город. Постарайтесь выяснить, из какой древесины изготовлены гранулы, отдавая предпочтение опилкам из твердых пород — такие опилки подойдут для большинства грибов (тем не менее, еловые опилки хорошо подходят для видов P. eryngii и A. subrufescens).

Основные понятия о перекиси водорода

Что перекись может обеспечить

Перекисный радикал — это химически активная форма кислорода, которая разрушает различные органические соединения. В живых клетках перекись поражает генетический материал, клеточные мембраны и все остальное, с чем он может реагировать. В этой связи, перекись в эффективной концентрации может убивать бактерии, бактериальные эндоспоры, грибки и грибковые споры, включая споры высших грибов. Перекись, без сомнения, способна уничтожать микроорганизмы, привнесенные из воздуха, а также источники заражения, связанные с кожными покровами человека (считается, что чешуйки кожи постоянно падают с грибовода в окружающее пространство). Перекись водорода, таким образом, в известной степени действует против всех воздушных источников заражения, включая споры самих грибов. Отмечу для контраста, что антибиотики действуют в основном против бактериального заражения, а фунгициды — только против грибков и плесеней.

Прелесть перекиси состоит в том, что он не убивает развитый мицелий и не мешает его росту и плодоношению. Несмотря на широкий спектр действия перекиси против известных источников заражения грибной культуры, существует достаточно широкий диапазон ее концентраций, при которых перекись не будет препятствовать росту и плодоношению грибов. Развитый мицелий, благодаря своей способности производить в больших количествах ферменты[60], разрушающие перекись, способен защитить себя от гораздо больших концентраций перекиси, чем изолированные споры, клетки или крошечные фрагменты многоклеточных организмов. Таким образом, мы можем добавить перекись водорода к грибной культуре без ущерба для роста мицелия, но небольшие источники заражения при этом погибнут.

Такой подход дает массу преимуществ. Совершенно очевидно, что в нашем случае отпадает необходимость в дорогостоящих, тщательно подобранных приборах и оборудовании для защиты окружающей среды от заражений. За счет добавления перекиси водорода к среде с грибной культурой становится возможным успешное осуществление всех стадий грибного культивирования, от изоляции мицелия до плодоношения, в нестерильной среде и без фильтрации воздуха. Становятся ненужными специальные чистые комнаты, ХЕПА-фильтры, префильтры, ламинарные боксы, ультрафиолетовые лампы, стерильные тамбуры, боксы с перчатками для стерильных работ (т. н. главбоксы) и любое другое оборудование, связанное с контролем бактериального заражения окружающей среды. Даже микропористые фильтры на пакетах или крышках банок становятся излишними. При использовании перекиси минимальный набор оборудования, необходимого для контроля над заражениями, может быть сведен к градуированным емкостям, источнику кипящей воды и большой кастрюле для обработки паром (или скороварке, для пущей безопасности). Это ненамного больше, чем можно найти на обычной кухне. В то время, как традиционные методы культивирования грибов требуют выполнения сложных стерильных техник и безупречной чистоты исполнителя при работе с агаровыми культурами и посевным мицелием, использование перекиси позволяет достичь успеха при умеренном соблюдении требований к стерильности и минимальном внимании к личной гигиене. Более того, становится возможным осуществлять выгонку плодовых тел (даже тех видов, которые распространяют чрезвычайно большое количество спор) в том же самом здании, где содержатся агаровые культуры и выращивается посевной мицелий, причем без опасения, что споры, распространяемые плодовыми телами, вторгнутся в агаровые культуры и уничтожат их. Перекись водорода однозначно убьет споры того же самого гриба, мицелий которого она (перекись) защищает.

Приобретают ли микроорганизмы, вызывающие заражение, устойчивость к воздействию перекиси, как это происходит в случае с антибиотиками? И да и нет. Многие из таких микроорганизмов уже устойчивы к перекиси, и если они образовали колонию, дальнейший ее рост будет очень интенсивным. Например, живая форма сине-зеленой плесени Aspergillus очень устойчива к перекиси. Тем не менее, перекись в достаточной концентрации несомненно преодолевает защитные механизмы одноклеточных организмов и отдельных спор, а также очень небольших изолированных многоклеточных организмов.

Чего перекись не может обеспечить

Перекись не отменяет полностью необходимость соблюдения правил стерильной работы. Повторюсь: не смотря на то, что добавленная перекись будет уничтожать отдельные споры, грибки и бактерии, пробравшиеся в ваши грибные культуры (а именно эти микроорганизмы являются основным источником проблем с заражением), перекись не сможет прекратить жизнедеятельность развитых многоклеточных организмов (например зеленой плесени), если размер колонии превысит некоторый размер. Перекись также не будет слишком эффективным против значительного скопления спор плесени. По всей видимости, многоклеточные организмы и большие скопления проросших спор способны вырабатывать достаточное количество разрушающих перекись ферментов для того, чтобы защитить себя от высоких концентраций перекиси во внешней среде. И в связи с тем, что микроскопические многоклеточные организмы и скопления спор могут находиться на ваших руках, частицах грязи и пыли, вам все равно придется соблюдать определенные меры предосторожности и держать ваши руки и любые нестерильные предметы подальше от культур на ранних сроках их развития, даже при добавлении перекиси. Несмотря на то, что можно не бояться оставлять культуры на открытом воздухе в течение непродолжительного времени для выполнения манипуляций или проверки их состояния, вам все равно придется предпринимать разумные меры против заражения. Например, не стоит более использовать крышку от чашки петри, если она упала на пол. Не стоит также допускать попадания на культуру какого-либо мусора или проникновения насекомых. Хорошим правилом будет периодическое вытирание пыли с полок, используемых для инкубации культур. В любом случае придется стерилизовать на пламени (или как-то еще) всякий инструмент, который используется для переноса ломтиков мицелия с одной культуры на другую. Лично я регулярно протираю пальцы спиртом перед выполнением инокуляций субстрата или агаровых культур. Я делаю то же самое со всеми поверхностями, на которых я произвожу манипуляции с чашками петри. Это уменьшает вероятность попадания в культуру крупных частиц и способствует защите открытого мицелия.

Очень важно знать и помнить, что перекись не защищает сам грибной мицелий от аэробных контаминантов. Мицелий разлагает перекись, с которым он контактирует, поэтому любые аэробные контаминанты, находящиеся